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看看“高手”如何選擇顯微鏡物鏡

時間: 2020-11-24 15:00 編輯: 北京瑞科中儀閱讀:

物鏡是顯微鏡的重要光學部件,是負責顯微鏡的第一次成像,并在成像的質量方面有著至關重要的作用,要想保證顯微鏡有高質量的成像,我們必須選擇合理的顯微鏡物鏡。
那么顯微鏡物鏡如何選擇呢?
看看“高手”如何選擇顯微鏡物鏡
顯微鏡的使用高手,往往在選擇顯微鏡物鏡的時候,僅僅把握住這幾點,那么選擇到的物鏡絕對可以保證在實際的應用中有著理想的成像質量。我們以奧林巴斯顯微鏡物鏡的選擇為例。在選擇物鏡的時候,我們要明確幾個問題,知道我們自己的需求是什么。一般情況下,我們會問:
標本尺寸是多少?
奧林巴斯顯微鏡物鏡具備從1.25倍至150倍的放大倍率范圍。這是為您的應用選擇最佳物鏡時所要考慮的第一個參數。該參數結合目鏡放大倍率就可以確定顯微鏡的整體放大倍率。
所要觀察標本小特征是什么?
顯微鏡物鏡第二個重要的參數是數值孔徑(NA)。數值孔徑用于衡量其匯聚光線的能力。這是用以確定分辨率、焦深和圖像亮度的重要因素。具有較大數值孔徑的物鏡可以匯聚更大范圍的光線,從而生成更明亮、更高分辨率的圖像。
數值孔徑對于觀察非常精細的結構或在熒光觀察過程中檢測弱信號也很重要。在確定哪種顯微鏡物鏡可以分辨標本的最小特征時,就需要考慮數值孔徑。在權衡選項利弊時,請記住數值孔徑范圍在0.04至1.7之間。
圖像視場和景深要求是什么?
視場數和景深是顯微鏡物鏡的兩個重要特性。
視場數或視場直徑是光學顯微鏡中視場的直徑。其以毫米為單位,并在中間像平面測量。記住,現代平場復消色差透鏡和其他專用平場物鏡通常具有22到26.5毫米(與廣角目鏡組合使用時或會更大)的可用視場。
物鏡的景深即在圖像銳度不發生明顯變化情況下的物鏡軸向聚焦范圍。該值從低數值孔徑物鏡到高數值孔徑物鏡變化很大;通常隨著數值孔徑的增加而減小。
分辨率要求是什么?
顯微鏡物鏡的分辨率決定了兩個可觀察物體之間的最小距離。其與光的照射波長成正比,與數值孔徑成反比。
數值孔徑越高,兩個物體之間的距離就越小。如前所述,選擇合適的數值孔徑對于確定顯微鏡系統的分辨率至關重要。
需要什么樣的工作距離?
工作距離(WD)即在標本對焦時從物鏡前透鏡到蓋玻片最近表面的距離。工作距離與數值孔徑成反比,這意味著數值孔徑較高的物鏡通常具有較短的工作距離。
如果您的應用是不需要蓋玻片的應用,并且要求焦平面與物鏡末端之間的距離更長(也就是觀察具有不規則形貌、精細結構或受到整體光學組件機械約束的樣品),那么您可能會發現奧林巴斯的LMPLFLN或SLMPLN長工作距離物鏡特別適合您的應用。
如果您需要觀察熒光樣品,那么熒光信號亮度如何?
如果您觀察的是微弱熒光信號的樣品,則建議您使用能夠匯聚更多光線的高數值孔徑物鏡。奧林巴斯擁有可提供從紫外線(UV)到近紅外(NIR)熒光激發的眾多品類顯微鏡物鏡。
使用的是多通道還是單通道熒光成像?
為了補償色差校正,您可以使用不同類型的物鏡:消色差物鏡,半復消色差物鏡和復消色差鏡。消色差物鏡的校正性能最低,半復消色差物鏡(或螢石)可進行額外的球面校正,而復消色差物鏡可進行最高級別的色差校正。
如果您的應用需要多通道熒光,那么我們建議使用奧林巴斯UPLXAPO升級版復消色差物鏡 。
看看“高手”如何選擇顯微鏡物鏡
⑧要使用哪種觀察方法?
在觀察過厚、過薄或雙折射樣品時,研究人員將會采用明場以外的其他觀察方法。通常使用的觀察方法為暗場、差分干涉對比(DIC)、相襯和偏光。奧林巴斯可提供相關觀察方法的專用物鏡。
您的樣品所使用的介質是什么?
很多顯微鏡物鏡設計以空氣為介質對標本進行成像,而還有一些顯微鏡物鏡則使用具有較高折射率的浸沒介質獲得較高的數值孔徑和分辨率。
比如,使用浸沒油代替空氣作為成像介質可以將分辨率提高大約1.5倍。
最常見的浸沒介質為空氣、水、油和硅油。為您的介質選配合適的物鏡可以提高圖像質量。
看看“高手”如何選擇顯微鏡物鏡
您所使用的是否是高端顯微鏡系統?
奧林巴斯可為諸如共聚焦、轉盤共聚焦、多光子激發和全內反射熒光(TIRF)顯微鏡等先進光學系統提供專用物鏡。如果您使用的是此類系統,那么為應用選擇正確的物鏡至關重要。
 
在明確以上關鍵信息后,那么在選擇物鏡的時候思路就會十分清晰,就可以化身顯微鏡高手對物鏡進行合理選擇。
更多顯微鏡使用細節等信息可咨詢北京瑞科中儀科技有限公司相關人員。

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